Кількісне визначення гемаглютинації вірусу грипу

24

У зв’язку з великим числом рецепторних молекул на поверхні еритроцита до кожної зрітроцітарной клітці може приєднатися велике число часток вірусу грипу. Було підраховано, що один еритроцит морокою свинки може адсорбувати на своїй поверхні близько 7000 вірусних частинок (Bateman et al., 1955). Однак, якщо в системі існує обмежене число віріонів, вірусні частинки і еритроцити утворюють агрегати, в яких обидва учасники реакції присутні в співвідношенні 1-20 вірусних частинок на один еритроцит (Tyrrell, Valentine, 1957; Seto et al., 1961; Hoyle, 1968 ).

Ступінь гемаглютинації, спостережувана з даними .Кількість вірусу, залежить від типу еритроцитів, штаму вірусу, а також від температури, рН та іонного складу середовища. Тип використовуваних ерітроцітних клітин є головним чинником, що визначає наявність або відсутність гемаглютинації. В реакції можуть бути використані еритроцити хребетних тварин – птахів, амфібій і ссавців (Hoyle, 1968). Ступінь аглютинації клітин і кількість вірусу, який вони здатні адсорбувати, варіює залежно від виду, до якого належить тварина, і індивідуального представника даного виду.

Вірусні частинки також розрізняються за своєю здатністю викликати гемаглютинацію. Таким чином, кількісний опис реакції гемаглютинації залежить від наявності детальних відомостей про всіх компонентах використовуваної системи. Наприклад, віріони знову ізольованих штамів грипу (т. Е. Штами, які пройшли тільки кілька пасажів в лабораторії) часто мають филаментозному форму, в той час як форма віріонів широко використовуваних лабораторних штамів зазвичай сферична. Вірусні частинки филаментозному форми можуть теоретично агглютинировать більше число еритроцитів; таким чином, ступінь спостережуваної аглютинації не обов’язково відображає кількість присутніх в системі вірусних частинок.

Для всіх вірусних штамів спостережувана ступінь аглютинації залежить від двох протилежних реакцій – адсорбції і елюції. Оскільки для адсорбції необхідні зіткнення між еритроцитами і вірусними частинками, швидкість цієї реакції визначається концентрацією реагентів і майже не залежить від температури. З іншого боку, еля-ція звичайно являє результат ферментної деструкції і тому є температурозависимого процесом. Вірусні штами, що володіють низькою нейрамінідазной активністю, можуть бути виявлені по реакції гемаглютинації при 20 ° С. Для штамів же з високою активністю нейрамінідази швидкість злюціі при 20 ° С може бути досить висока, так що аглютинація може і не спостерігатися. Ефект аглютинації для таких вірусів може виявлятися -при 4 ° С або при 20 ° С після деструкції віріонної нейрамінідази с (допомогою м’якої теплової обробки (Hirst, 1948b; Stone, 1949).

Розроблено велику кількість різних методик для виявлення гемаглютинації, индуцируемой вірусними частинками. Зазвичай кратні розбавлення вірусу инкубируют спільно зі стандартною суспензією еритроцитів і наявність гемаглютинації виявляють візуально (Salk, 1944) або за допомогою денситометрії. В останньому випадку опектрофото-метричні виміри суміші вірусів з еритроцитами проводять після стандартного періоду інкубації для формування осаду (Hirst, Pickels, 1942; Levine et al., 1953; Horsfall, 1954; Drescher, 1957). Зовсім недавно розроблена методика, згідно з якою агглютинацию виявляють кількісно за допомогою визначення кількості гемоглобіну, що вивільняється з еритроцитів, що не зазнали аглютинації даними розведенням вірусу (Cohen, Belyavin, 1966). Кількість гемоглобіну визначали і реєстрували за допомогою автоматичного аналізатора. Крім того, розроблені методики визначення концентрації субодиниць гемаглютиніну (Drescher, 1966, 1967).

З усіх описаних методик найбільш часто застосовують пряме візуальне визначення кінцевої точки титрування по картині аглютинації. При цьому зазвичай використовують еритроцити курчати і кратні подвійні розведення в пробірках або в лунках пластмасових пластин (при цьому реакція може бути проведена в мікрообсязі). Коли необхідно провести більш точне визначення, або використовують метод кратних розведень, розроблений Horsfall і Tamm (1953), або визначають кінцеву точку аглютинації за допомогою денситометра. Стандартна помилка кінцевого вірусного титру, визначеного методом кратних розведень, становить приблизно 17% (Horsfall, Tamm, 1953). Drescher (1957) показав, що при використанні спектрофотометрич-ської методики помилка становить 3%.

Джерело: Віруси грипу та грип, під ред. Кільбурн Е.Д – М.Медицина, 1978р.

Список використаної літератури:

Інструкція до застосування медичного препарату НАЗОФЕРОН; 2) «Аллергология и иммунлогия: национальное руководство» под. ред.. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2009 г.; 3) Г.М. Драннік. Клінічна імунологія та алергологія. – Київ. «Здоров’я», 2006 р. 4) Наказ МОЗ України від 16.09.2011 № 595 «Про порядок проведення профілактичних щеплень в Україні та контроль якості й обігу медичних імунобіологічних препаратів»; 5) Г.В. Бекетова «Інтерферони в лікуванні гострих респіраторних інфекцій у дітей», журнал «Ліки України» № 3, (149), 2011 р.; 6) Шехтман М.М., Положенкова Л.А. Гострі респіраторні захворювання у вагітних / / Гінекологія. – 2005. – Т. 7. – № 2. – С. 34-37; 7)Приступа, Л.Н. Грип та гострі респіраторні вірусні інфекції у вагітних: Особливості Лікування та профілактики / / Медичні аспекти здоров’я жінки. – 2008. – № 5 (14). – С. 14-19; 8) Тарбаева Д.А., Костинов М.П., Загородня Е.Д., Іозефсон С.А., Черданцев А.П.Акушерскі і перинатальні наслідки вагітності, ускладненої гострою респіраторною інфекцією в II триместрі гестації / / Журнал “Акушерство і гінекологія.” – 2012. – № 2; 9) С.О.Крамарєв, д.м.н., професор В.В. Євтушенко «Оцінка ефективності рекомбінантного інтерферону альфа для лікування та профілактики гострих респіратоних вірусних інфекцій у дітей», журнал «Здоров’я України», № 18/1, 2008 р.; 10) А.А.Ярилин. Імунологія. Підручник. Москва. «Геогар-медіа». 2010 р.; 11) О.М. Біловол, П.г. Кравчун, В.Д. Бабаджан. «Клінічна імунологія та алергологія». Навчальний посібник медичних ВНЗ IV рівня акредитації та медичних факультетів університетів. Харків. «Гриф», 2011 р.; 12) С.О. Крамарєв, О.В. Виговська, О.Й. Гриневич «Обгрунтування застосування препаратів інтерферону при гострих респіраторних інфекціях у дітей», журнал «Клінічна імунологія. Алергологія. Інфектологія. 2007. № 10.»; 13) Є.І. Юліш, д.м.н. професор О.Є. Чернишева, Ю.А. Сорока «Інтерферонотерапія при ГРВІ і дітей», журнал «Здоров’я України» № 1(16), березень 2011 р.; 14С.П. Кривопустов «Інтаназальне використання інтраназального інтерферону альфа в педіатрії», журнал «Здоров’я України № 1, квітень 2010 р.»; 14) Лікування гострих респіраторних вірусних інфекцій у дітей, які часто хворіють: прості відповіді на складні запитання. Л.В. Беш, О.І. Мацюра, Львівський національний медичний університет ім. Данила Галицького, Львівський міський дитячий алергологічний центр. 2012 р.; 15) Діти, які часто хворіють: дискусійні питання і можливості їх вирішення. Л.В. Беш, Львівський національний медичний університет ім. Данила Галицького, Львівський міський дитячий алергологічний центр. 2011 р.; 16) Назоферон – на варті здоров’я у дітей. А.П. Волосовець. 2010 р.; 17) Наказ МОЗ України від 07.11.2009 № 814 "Про затвердження Клінічного протоколу діагностики та лікування у дітей пандемічного грипу, спричиненого вірусом (А H1/N1 Каліфорнія)"; 18) Наказ МОЗ України від 13.11.2009 № 832 "Про внесення змін до наказу МОЗ від 20.05.2009 №189-Адм „Про затвердження „Протоколу діагностики та лікування нового грипу А H1/N1 Каліфорнія) у дорослих"; 19) Наказ МОЗ України від 09.07.2004 № 354 Про затвердження Протоколів діагностики та лікування інфекційних хвороб у дітей; 20) Наказ МОЗ України від 21.04.2005 № 181 Про затвердження Протоколів надання медичної допомоги дітям за спеціальністю "дитяча отоларингологія"; 21) Наказ МОЗ України від 03.07.2006 № 433 Про затвердження протоколів надання медичної допомоги за спеціальністю „Пульмонологія"; 22) Наказ МОЗ України від 13.01.2005 № 18 Про затвердження Протоколів надання медичної допомоги дітям за спеціальністю "дитяча пульмонологія"; 23) Наказ МОЗ України від 09.07.2004 № 355 Про затвердження Протоколів лікування дітей за спеціальністю "Дитяча імунологія"; 24) Грип у дітей. О. К. Александрова. Посібник для лікарів та учнів медичних ВУЗІВ. Краснодар 2008; 25) ЗАГАЛЬНА БІОЛОГІЯ І МІКРОБІОЛОГІЯ ОСНОВИ ВІРУСОЛОГІЇ ОСОБЛИВОСТІ РЕПРОДУКЦІЇ ВІРУСІВ. Навчальний посібник для модульно-рейтингової технології навчання. С.В. Лаптєв, Н.І. Мезенцева. Бійськ 2005.; 26) Особливості харчування вагітних і жінок у період лактації. Н.А. Коровіна, Н.М. Подзолкова, І.М. Захарова. Москва 2008; 27) «Тиждень за тижнем». Сучасний довідник для майбутніх мам. Бердникова О.В. Москва 2007; 28) МЕДСЕСТРИНСТВО ПРИ ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБАХ. М.А. Андрейчин. О.Л. Івахів. Тернопіль, «Укрмедкнига», 2002 р.; 29) Вакцинація дитини. Краще запобігти, ніж захворіти. Інформація для батьків ©UNICEF/UKRAINE/2010/G.Pirozzi; 30) МЕДСЕСТРИНСТВО В ТЕРАПІЇ. За загальною редакцією проф. М.І. Шведа та проф. Н.В. Пасєчко. Тернопіль..