Нуклеокапсид вірусу грипу

20 nuklekapsid

Внутрішня структура віріонів грипу при негативному контрастуванні препаратів проявляється досить рідко, тому основна інформація про структуру внутрішнього рібонуклеоіротеіда (РНП) була отримана гару вивченні ізольованих РНП і вірусних частинок за допомогою ультратонких зрізів. Існує загальна думка, що РНП представлений в віріоні у вигляді окремих фрагментів, кожен з яких складається з однієї молекули РНК, великого числа однакових молекул поліпептада NP і, ймовірно, з однієї або декількох молекул полімерази Р.

Рибонуклеопротеїдів може бути виділений з віріонів в градієнті щільності після їх руйнування за допомогою обробки такими детергентами, як NP40 або ефір. Якщо структури, отримані після такого виділення, досліджувати за допомогою негативного контрастування уранілацетатом або фосфовольфрамовой кислотою, можна спостерігати нитки діаметром 10-15 нм, довжина яких варіює в межах 30-110 нм (Pons et al., 1969; Schulze et al., 1970 ; Corapans et al., 1972). Нитки іноді мають петлі на одному з кінців і добре помітні повторювані сліди глибокої і дрібної борозенок, що свідчать про те, що ця структура утворена ниткою, закрученої і згорнутої в подвійну спіраль. На 12 показана гіпотетична модель РНП. Препарат РНП можна Фракціоновані на декілька класів розрізняються до розмірами молекул за допомогою швидкісної седиментації, що відображає наявність у сумарній фракції фрагментів РНК з різною молекулярною масою (Duesberg, 1969; Pon’s, 1971). Фракції після поділу містять структури однакового діаметра і істотно різної довжини (Compans et al., 1972). Розподіл по довжині ізольованих РНП було вивчено в дослідах з використанням як контрастує речовини уранілацетатом, який переважно зв’язується з нуклеїнової кислотою. Найбільш швидко седіментірующій РНП має максимум на кривій розподілу фрагментів за довжиною при 90-ПО нм, РНП з середніми розмірами – при 60-90 нм і найкоротший РНП – при 30 – 50 нм. Ці значення довжини РНП можуть бути окорреліровани з молекулярною масою нуклеїнових кислот, що входять до складу РНП різних класів. Так, найбільший за розмірами РНП містить РНК з самою великою молекулярною масою-106. В РНП приблизно 10-12% маси доводиться на РНК, а решта – на білок, який практично повністю представлений субодиницями поліпептиду NP (Ponse et al., 1969; Krug, 1971). Використовуючи ці дані, можна розраховувати, що на 100 нм нитки РНП припадає близько 150 субодиниць білка з молекулярною масою 60 000, тобто один виток спіралі РНП містить приблизно 12 субодиниць цього білка, і на одну білкову субодиницю припадає 20 нуклеотидів (Compans et al., 1972).

Дослідження віріонів грипу за допомогою методу ультратонких зрізів підтвердило ту точку зору, що вірусний РНП являє собою всередині вірусної частки набір коротких фрагментів РНП (Compans, Dimmock, 1969; Bactu et al., 1969; Compan’s et al., 1970b; Shulze , 1973). Віріони в момент отпочковивання зазвичай злегка витягнуті і внутрівен-вірусні нитки РНП розташовуються паралельно довгій осі частинки (Compans, Dimmock, 1969). Негативний контрастування за допомогою уранілацетатом вірусних частинок, позбавлених поверхневих «шпильок» при обробці протеазой, виявило наявність великої кількості внутрівірусних ниток, морфологія яких збігалася з морфологією РНП, ізольованого з віріонів за допомогою обробки детергентом (Schulze, 1973). Таким чином, різні методичні прийоми, що дозволяють спостерігати внутрішню структуру більшого числа вірусних частинок популяції, виявляють, що РНП знаходиться в вірусної частці у фрагментованому стані. При негативному контрастуванні в деяких віріонах спостерігаються великі бухтообразні структури (Apostolov, Flewett, 1965; Almeida, Waterson, 1970; Schulze et al., 1970). Передбачалося, що ці структури представляють собою «інтактні» нуклеокапсиди віріонів грипу та що РНП, який ізолюється з вірусних частинок, є продуктом фрагментації цих структур (Almeida, Waterson, 1970). Однак наявність петель на одному з кінців ізольованою нитки нуклеопротеіда, а також той факт, що довжини ниток згруповані в дискретні групи (Compans et al., 1972), підтверджують точку зору, згідно з якою отримані при ізоляції з (віріонів нитки РНП не є прямими продуктами фрагментації великих за розмірами структур. Крім того, як вже було описано, при дослідженні ультратонких зрізів вірусних частинок, коли дозволяється внутрішня структура більшості віріонів, великі бухтообразні структури виявляються дуже рідко, а іноді і взагалі не спостерігаються. удеяких випадках подібні структури знаходять в інфікованих клітинах, проте ще немає доказів, що вони мають якесь відношення до вірусних РНП. Наявність зв’язку цих бухтообразних структур з віріонами буде доведено тільки після їх ізоляції в чистому вигляді і визначення їх хімічного складу.

На підставі високої частоти рекомбінацій, характерною для вірусів грипу, передбачалося, що фрагменти РНП включаються до вірусну частку з внутрішньоклітинного резервуара випадково (Hirst, 1962). Хоча може бути строго доведено, що в результаті такого випадкового процесу лише в рідкісних випадках формуватимуться віріони, що містять всі фрагменти геному, необхідні для здійснення інфекційне, тим не менше відносна кількість інфекційних віріонів в популяції вірусу значно збільшиться, якщо віріони будуть містити надмірну кількість фрагментів РНК (Compans et al., 1970b). Доказ випадкового включення фралментов РНК в віріони грипу грунтується на спостереженні Hirst і Pons (1973), що полягає в тому, що агрегати віріонів грипу, як виявляються при нормальних умовах, так і утворені штучно за допомогою нуклеогістона, мають підвищену інфекційність. Ці результати вказують на наявність комплементації двох або більшої кількості вірусних часток, кожна з яких окремо не містить повного набору фрагментів РНК, необхідного для здійснення інфекційності.

рибонуклеопротеїдів вірусу грипу за деякими своїми властивостями відрізняється від спірального нуклеокапсида параміксовірусів. РНК нуклеопротеіда вірусу грипу на відміну від РНК у складі нуклеокапсида парамиксовирусов (Compans, Choppin, 1968) чутлива до дії рібонуклеази (Duesberg, 1969; Kingsbury, Webster, 1969; Pons. Et al., 1969). Обробка РНП вірусу грипу полівінілсульфатом вивільняє РНК і утворює комплекс субодиниць білка з полівінілсульфатом, структура якого дуже схожа із структурою РНП (Pons et al., 1969; Goldstein, Pons, 1970). Нуклеокалсіди парамиксовирусов нечутливі до такої обробці (Goldstein, Pons, 1970). Таким чином, механізми взаємодії РНК – білок для цих двох структур істотно різні, причому РНК вірусу грипу, що входить до складу РНП, ймовірно, більш доступна зовнішніх впливів.

рибонуклеопротеідів вірусу грипу чутливий також до дії протеази (Pons et al., 1969). При низьких концентраціях пронази РНП не змінює свої седиментаційні параметри, однак при попередній обробці препарату рібонуклеазою проказа призводить до деградації РНП (Duesberg, 1969). Отже проназа може розщеплювати зв’язку між субодиницями білка, що не впливаючи на структури, цілісність яких визначається взаємодією білкових субодиниць з молекулами РНК.

З РНП, ізольованим з віріонів грипу (Bishop, 1972) або з інфікованих їм клітин (Caliguiri, Compans, 1974), ймовірно, пов’язані мінорні поліпептиди Р. Оскільки в кожному фрагменті РНП може міститися лише кілька молекул цих поліпіптідів, здається малоймовірним , що вони грають якусь роль у підтримці структури РНП. Точна локалізація молекул поліпептидів Р поки невідома. Ймовірно, вони приєднуються до РНП менш міцно, ніж молекули поліпептиду NP, оскільки вони можуть видалятися під час очищення (Schulze, 1973). Мінорні поліпептиди Р можуть входити до складу вірусної транскриптази (Bishop et al., 1972) або бути ініциаторного поліпептидами для «одягання» РНК білком РНП.

Джерело: Віруси грипу та грип, під ред. Кільбурн Е.Д – М. Медицина, 1978р.

Список використаної літератури:

Інструкція до застосування медичного препарату НАЗОФЕРОН; 2) «Аллергология и иммунлогия: национальное руководство» под. ред.. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2009 г.; 3) Г.М. Драннік. Клінічна імунологія та алергологія. – Київ. «Здоров’я», 2006 р. 4) Наказ МОЗ України від 16.09.2011 № 595 «Про порядок проведення профілактичних щеплень в Україні та контроль якості й обігу медичних імунобіологічних препаратів»; 5) Г.В. Бекетова «Інтерферони в лікуванні гострих респіраторних інфекцій у дітей», журнал «Ліки України» № 3, (149), 2011 р.; 6) Шехтман М.М., Положенкова Л.А. Гострі респіраторні захворювання у вагітних / / Гінекологія. – 2005. – Т. 7. – № 2. – С. 34-37; 7)Приступа, Л.Н. Грип та гострі респіраторні вірусні інфекції у вагітних: Особливості Лікування та профілактики / / Медичні аспекти здоров’я жінки. – 2008. – № 5 (14). – С. 14-19; 8) Тарбаева Д.А., Костинов М.П., Загородня Е.Д., Іозефсон С.А., Черданцев А.П.Акушерскі і перинатальні наслідки вагітності, ускладненої гострою респіраторною інфекцією в II триместрі гестації / / Журнал “Акушерство і гінекологія.” – 2012. – № 2; 9) С.О.Крамарєв, д.м.н., професор В.В. Євтушенко «Оцінка ефективності рекомбінантного інтерферону альфа для лікування та профілактики гострих респіратоних вірусних інфекцій у дітей», журнал «Здоров’я України», № 18/1, 2008 р.; 10) А.А.Ярилин. Імунологія. Підручник. Москва. «Геогар-медіа». 2010 р.; 11) О.М. Біловол, П.г. Кравчун, В.Д. Бабаджан. «Клінічна імунологія та алергологія». Навчальний посібник медичних ВНЗ IV рівня акредитації та медичних факультетів університетів. Харків. «Гриф», 2011 р.; 12) С.О. Крамарєв, О.В. Виговська, О.Й. Гриневич «Обгрунтування застосування препаратів інтерферону при гострих респіраторних інфекціях у дітей», журнал «Клінічна імунологія. Алергологія. Інфектологія. 2007. № 10.»; 13) Є.І. Юліш, д.м.н. професор О.Є. Чернишева, Ю.А. Сорока «Інтерферонотерапія при ГРВІ і дітей», журнал «Здоров’я України» № 1(16), березень 2011 р.; 14С.П. Кривопустов «Інтаназальне використання інтраназального інтерферону альфа в педіатрії», журнал «Здоров’я України № 1, квітень 2010 р.»; 14) Лікування гострих респіраторних вірусних інфекцій у дітей, які часто хворіють: прості відповіді на складні запитання. Л.В. Беш, О.І. Мацюра, Львівський національний медичний університет ім. Данила Галицького, Львівський міський дитячий алергологічний центр. 2012 р.; 15) Діти, які часто хворіють: дискусійні питання і можливості їх вирішення. Л.В. Беш, Львівський національний медичний університет ім. Данила Галицького, Львівський міський дитячий алергологічний центр. 2011 р.; 16) Назоферон – на варті здоров’я у дітей. А.П. Волосовець. 2010 р.; 17) Наказ МОЗ України від 07.11.2009 № 814 "Про затвердження Клінічного протоколу діагностики та лікування у дітей пандемічного грипу, спричиненого вірусом (А H1/N1 Каліфорнія)"; 18) Наказ МОЗ України від 13.11.2009 № 832 "Про внесення змін до наказу МОЗ від 20.05.2009 №189-Адм „Про затвердження „Протоколу діагностики та лікування нового грипу А H1/N1 Каліфорнія) у дорослих"; 19) Наказ МОЗ України від 09.07.2004 № 354 Про затвердження Протоколів діагностики та лікування інфекційних хвороб у дітей; 20) Наказ МОЗ України від 21.04.2005 № 181 Про затвердження Протоколів надання медичної допомоги дітям за спеціальністю "дитяча отоларингологія"; 21) Наказ МОЗ України від 03.07.2006 № 433 Про затвердження протоколів надання медичної допомоги за спеціальністю „Пульмонологія"; 22) Наказ МОЗ України від 13.01.2005 № 18 Про затвердження Протоколів надання медичної допомоги дітям за спеціальністю "дитяча пульмонологія"; 23) Наказ МОЗ України від 09.07.2004 № 355 Про затвердження Протоколів лікування дітей за спеціальністю "Дитяча імунологія"; 24) Грип у дітей. О. К. Александрова. Посібник для лікарів та учнів медичних ВУЗІВ. Краснодар 2008; 25) ЗАГАЛЬНА БІОЛОГІЯ І МІКРОБІОЛОГІЯ ОСНОВИ ВІРУСОЛОГІЇ ОСОБЛИВОСТІ РЕПРОДУКЦІЇ ВІРУСІВ. Навчальний посібник для модульно-рейтингової технології навчання. С.В. Лаптєв, Н.І. Мезенцева. Бійськ 2005.; 26) Особливості харчування вагітних і жінок у період лактації. Н.А. Коровіна, Н.М. Подзолкова, І.М. Захарова. Москва 2008; 27) «Тиждень за тижнем». Сучасний довідник для майбутніх мам. Бердникова О.В. Москва 2007; 28) МЕДСЕСТРИНСТВО ПРИ ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБАХ. М.А. Андрейчин. О.Л. Івахів. Тернопіль, «Укрмедкнига», 2002 р.; 29) Вакцинація дитини. Краще запобігти, ніж захворіти. Інформація для батьків ©UNICEF/UKRAINE/2010/G.Pirozzi; 30) МЕДСЕСТРИНСТВО В ТЕРАПІЇ. За загальною редакцією проф. М.І. Шведа та проф. Н.В. Пасєчко. Тернопіль..